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重庆石柱县冬虫夏草提高含量方法

发布者:admin发布时间:2018-05-19浏览量:

石柱县地处渝东褶皱地带,属巫山大娄山中山区。境内地势东高西低,呈起伏下降。县境为多级夷平面与侵蚀沟谷组合的山区地貌,群山连绵,重峦叠嶂,峰坝交错,沟壑纵横。地表形态以中、低山为主,兼有山原、丘陵。西北方斗山背斜、东南老厂坪背斜,顺北东、南西近似平行纵贯全境,形成“两山夹一槽”的主要地貌特征。

服务地区:

石柱县辖3个街道、16个镇、14个乡。3个街道:南宾街道、万安街道、下路街道;16个镇:西沱镇、黄水镇、悦崃镇、临溪镇、马武镇、沙子镇、王场镇、沿溪镇、龙沙镇、鱼池镇、三河镇、大歇镇、桥头镇、万朝镇、冷水镇、黄鹤镇;14个乡:黎场乡、三星乡、六塘乡、三益乡、王家乡、河嘴乡、石家乡、枫木乡、中益乡、洗新乡、龙潭乡、新乐乡、金铃乡、金竹乡。


石柱县冬虫夏草实拍图


冬虫夏草提高活性物质含量方法
 

一种人工栽培北冬虫夏草提高其生理活性物质含量的方法,其特征在于:

按如下工艺流程操作: 

(1)菌种分离:将新鲜野生北冬虫夏草洗干净,按体积百分比计采用0.1~0.3%浓度的二氯化汞HgCL2、70~75%浓度的乙醇或10~30%浓度的双氧水H2O2作为表面消毒剂,3~5分钟后,无菌水冲洗5~10次,无菌条件下将其切成薄片,待用; 
 

(2)斜面菌种培养:培养基成分按重量百分比计,其成分为葡萄糖1~2%,蛋白胨0.5~2.0%,酪素。

摘要:本发明为一种北冬虫夏草子实体人工培育方法及其鲜活虫草产品;
 

通过优良菌株(虫体)采集、分离、筛选、纯化得到高效丰产的菌种,加入培养基在温控条件下培养子实体,生产出北冬虫夏草,另外,饲养的蚕蛹活体,进入接种,引出复壮培养的虫草进行再生产,经检验包装入库出厂,其特征在于:菌种注入 PP瓶装的培养基中,在光照、温控条件下培养子实体,生成鲜活虫草商品,本发明方法获取的鲜活虫草子座橙红色、圆柱形,长4.5~8.5厘米,直径3~4毫米,头部圆柱形至棍棒形,柄柱状。

冬虫夏草样品近拍图
 

本发明人工培育鲜活虫草达到的营养和药用价值高于天然冬虫夏草,并使虫草素和SOD(双歧超氧化物酶)含量更高,虫草多糖含量高于天然虫草4.5倍,SOD含量3000u/g,高于天然冬虫夏草80余倍,是一种成本低、功效高、价格低廉附加值高的滋补品。  


主权项: 权利要求书 

一种北冬虫夏草子实体人工培育方法,它是运用菌种复壮技术,即通过北冬虫夏草的虫体回接,从而防止和延缓菌种退化,使子实体达到丰产,形成周年规模化生产的方法,其特征在于将野生虫草菌菌丝体回接到蚕蛹体内进行复壮,然后取其复壮后的虫草菌接种到专用PP瓶内的培养基中,放在培养架上培养,室内温度控制在18~22℃,先在无光条件下培养一周,后移至散射光下继续养28~32天,产生子实体,二个月后子实体成熟最终形成鲜活虫草产品,其工艺技术路线如下: 
 

虫体采集、分离、培养、筛选、接种、培养基、在光照、温控条件下子实体培育、检测、包装、入库、出厂;
 

另外野生虫草菌回接到蚕蛹虫活体内,引出复壮培养虫草菌进行再生产。   

 

冬虫夏草干货实拍图

 

冬虫夏草试验提取样品溶剂的选择      

由于腺苷的含量较低,干扰成分多,曾采用药典方法及文献报道[2,3]的方法,用90%甲醇和15%甲醇提取,均分离不好,拖尾严重,后经多次实验,采用30%乙醇超声提取后,蒸干,进行检测,峰形的对称性比较好,并消除了腺苷峰的拖尾现象及干扰峰,取得了较好的分离效果。
 

HPLC检测器波长的选择  

取腺苷标准品溶液适量,调节波长在200~400nm区间,在光电二极管阵列检测器中测出吸收光谱图,结果显示在260nm处有最大吸收,因此选择260nm为检测波长。
 

流动相的选择  

利用药典方法中流动相:磷酸盐缓冲液(PH6.5)[取0.01mol·L-1磷酸二氢钠68.5ml与0.01mol·L-1磷酸二氢钠31.5ml,搅拌均匀,调PH6.5]甲醇(17:3)及0.05mol·L-1磷酸二氢钾—甲醇为流动相,经过这两种流动相的试验,选择0.05mol·L-1磷酸二氢钾—甲醇为流动相,以不同与比例进行反复试验,确定比例为(90:10)时峰形及出峰时间适宜。  

冬虫夏草样品近拍画面

 

测定方法及测定结果  

1 分析溶液  

1.1 制备对照品的标准溶液  

准确称取腺苷标准品0.0160g(经五氧化二磷为干燥剂减压24h),再加入30%的乙醇溶液溶解,加入50ml容量瓶中稀释至刻度线,摇匀,作为标准品储备液。
 

1.2 样品溶液的制备  

准确称取冬虫夏草含片和菌粉各2.0000g,分别准确加入30%的乙醇溶液10ml,密塞,称定重量,超声30min,放至室温,再称定质量,用稀乙醇补足减失的重量,摇匀,过滤。

按同样方法连续3次,将所得的滤液置于100ml容量瓶中并稀释至刻度,摇匀,作为试验溶液。  
 

2 HPLC色谱条件      

色谱柱:C18,(4.6mm×250 mm,5um);流动相:0.05mol·L-1磷酸二氢钾+甲醇(90+10);检测波长260nm;流速1.0ml·min-1;柱温:35℃。  
 

3 HPLC的试验过程及测定结果  

3.1 系统适应性的试验  

在上述色谱条件下,分别把试验溶液、标准品溶液放入自动进样器由计算机自动控制定量阀(进样量为10ul),按预先编制注射样品的操作程序工作。取样、进样、复位、样品管路清洗和样品盘的转动,全部按预定程序自动进行。